Cromatografia în strat subțire este o metodă de analiză chimică bazată pe utilizarea unui strat sorbent cu grosimea de 0,1-0,5 mm ca fază staționară. Metoda TLC poate fi utilizată în diverse domenii și permite determinarea unei game largi de compuși chimici.
Principiul metodei
Metoda cromatografiei în strat subțire s-a născut din cromatografia pe hârtie și primele experimente au fost efectuate în anii 80 ai secolului al XIX-lea. Utilizarea activă a acestei analize a început abia după 1938.
Tehnica TLC include o fază mobilă (eluant), o fază staționară (sorbent) și un analit. Faza staționară este aplicată și fixată pe o placă specială. Placa poate fi realizată din sticlă, aluminiu sau plastic - acestea sunt substraturi reutilizabile care trebuie spălate bine, uscate și pregătite pentru aplicarea sorbentului după fiecare utilizare. De asemenea, este posibil să utilizați plăci de hârtie care sunt eliminate după utilizare.
Silica gelul este cel mai des folosit ca fază staționară, dar este posibil să se utilizeze alți sorbanți, de exemplu, oxidul de aluminiu. Atunci când se utilizează unul sau altul sorbent, tehnologia trebuie urmată cu strictețe pentru ca rezultatul să fie corect, de exemplu, deoarece gelul de siliciu poate da un rezultat incorect dacă aerul din laborator este prea umed.
Solvenții sunt folosiți ca fază mobilă, de exemplu, apă, acid acetic, etanol, acetonă, benzen. Alegerea unui solvent trebuie luată în mod responsabil, deoarece rezultatul cromatografiei depinde în mod direct de calitățile sale (vâscozitate, densitate, puritate). Se selectează un solvent individual pentru fiecare probă analizată.
Analiză
Proba trebuie diluată într-un solvent. Dacă nu are loc dizolvarea completă și rămân prea multe impurități, atunci proba poate fi curățată prin extracție.
Aplicarea probei pe placă se poate face automat sau manual. Aplicarea automată utilizează o metodă de microspray în care fiecare probă este pulverizată pe zona corespunzătoare a substratului. Pentru aplicarea manuală, se utilizează o micropipetă. Semnele creionului sunt plasate pe farfurie pentru fiecare probă. Fiecare probă este aplicată cu un capilar pe placă într-o singură linie, la o distanță suficientă de semne, astfel încât să nu reacționeze cu carbonul din plumb.
Placa este plasată într-un vas, la baza căruia se toarnă eluantul. Suportul este plasat cu o margine în vas până la linia marcată. Vasul este bine închis pentru a evita evaporarea fazei mobile. Sub acțiunea forțelor capilare, eluantul începe să se ridice în stratul de sorbent. Când eluantul atinge un anumit nivel, placa este scoasă din vas și uscată.
Dacă substanța dorită nu are culoare, atunci nu va fi vizibilă pe substrat. Prin urmare, se efectuează vizualizarea - procesarea plăcii cu vapori de iod sau alți coloranți.
După o astfel de procesare, rezultatul este evaluat. Zonele colorate de intensitate variabilă apar pe absorbant. Pentru a determina o substanță (sau un grup de substanțe), zonele colorate, dimensiunea, intensitatea și mobilitatea acestora sunt comparate cu un eșantion de referință.
Metoda TLC este utilizată pe scară largă, deoarece este rapidă, ieftină, precisă, intuitivă, nu necesită echipamente complexe și este ușor de interpretat.
